1、p62与细胞自噬

p62作为重要的自噬受体，也称为SQSTM1（Sequestosome 1）蛋白，参与多种细胞信号转导调控、氧化应激及自噬过程。p62包括4个结构域，分别是PB1，TB，LIR，UBA。其中LIR结构域负责与自噬体膜蛋白Atg8/LC3结合，将包含p62的蛋白聚合物转运到自噬体。UBA结构域可以招募泛素化蛋白，与蛋白质的泛素化密切相关，尤其是当蛋白被暴露在氧化剂和蛋白酶体抑制剂时。在自噬过程中，p62与泛素化的蛋白质结合，再与定位于自噬小体内膜上的LC3-II蛋白形成复合物，一同在自噬溶酶体内降解；相反，自噬抑制蛋白可以稳定p62蛋白水平。因此，自噬发生时，p62与LC3蛋白可发生荧光共定位，并且，在Co-IP中发生蛋白共沉淀且细胞质中蛋白会被不断降解;而当自噬活性减弱或者自噬系统受损时，p62蛋白会在细胞质中不断积累，因而p62也是反映自噬活性的重要标记蛋白之一，其蛋白含量间接反映自噬小体清除水平，与自噬流呈负相关。

图1 自噬信号通路示意图

 

2、p62最新研究进展-相分离

清华大学俞立课题组 (Cell Res, 2018) 和维也纳大学Sascha Martens教授 (EMBO J，2018) 等证实p62可以通过相分离实现p62小体的形成。俞立课题组详细研究了泛素（ubiquitin）在p62相分离中的正调节作用。这些重要的研究阐明了p62的相分离及泛素结合的调节作用，但p62相分离的复杂调节机制还远未阐明。2019年8月21日英国普利茅斯大学罗寿青教授和复旦大学鲁伯埙教授课题组合作揭示一个新的p62相分离调节机制，而且首次证实DAXX不仅是组蛋白H3.3的伴侣蛋白和细胞凋亡调节因子，还可以在自噬及调节细胞氧化还原稳态平衡上发挥重要作用，该研究成果荣登Nature Communications杂志。

 

3、p62检测注意事项

在自噬过程中，p62蛋白大多同时存在两种状态：可溶性和不可溶性，因而检测中通常需要结合LC3B-I/II转化来判断自噬流状况。

状况

✔状况一：
可溶性p62蛋白减少，不可溶性p62无明显改变，同时LC3B-I向 LC3B-II转化增加，表明自噬流活化；
✔状况二：
可溶性p62蛋白减少，但不可溶性p62明显增加，则无论LC3B是否发生I型向II型的转化均代表了自噬流阻断；
✔状况三：
即使可溶性p62蛋白水平降低，不可溶性p62无明显改变,但LC3B没有发生I型向II型的转化，也不能说明自噬流一定活化。
需要注意的是LC3B在自噬出现活化或抑制时,其蛋白水平改变较为迅速,而作为自噬底物,尤其是作为自噬活化时的标记物时，由于表达变化的滞后性，所以检测和观察时周期可适当延长。目前通过检测 p62判断自噬流最为准确的方法是联合WB和免疫染色技术, 包括免疫组化和免疫荧光。一方面可以检测到细胞内p62不同形态的含量变化,另一方面可以观察不同形式p62在细胞内的定位。

总体来说，LC3B-II的增加与p62的降低并不具有绝对一致性,要想正确评价自噬流受阻或自噬系统受损应当同时检测LC3B的转化与可溶性和不可溶性p62的变化。
Tip：获取不可溶性p62的方法主要是在常规细胞裂解离心后,向离心沉淀中加入高浓度尿素或盐酸胍,使形成包涵体的不可溶性p62溶解,随后便可使用常规蛋白质电泳进行检测。

 

4、p62重组兔单抗

图2 第四代重组兔单抗制备流程

ABclonal第四代重组兔单克隆抗体制备采用创新的细胞分选，富集，生物信息学，和重组单克隆抗体技术，直接从B细胞中获得理想的兔单克隆抗体。ABclonal在加强自身抗体升级的同时，也可对外承接兔单抗定制服务

p62/ SQSTM1重组兔单抗产品优势

✔多物种多应用（Human/Mouse/Rat, WB/IHC/IF）；
✔特应性好（KO验证，IF观察到自噬体，IHC染色准确）；
✔批次更稳定（抗体编码序列已知，质粒保存，重组表达方式获得抗体）；
✔性价比高（可回收利用）。

 

5、A19700 p62/ SQSTM1数据展示

为了助力自噬相关研究，ABclonal研发和生产了众多高质量自噬相关抗体（表1）。

 

6、表1 自噬抗体list（节选）