什么是ABclonal ?

ABclonal-第四代重组兔单抗先行者!

自噬标志物LC3B重组兔单抗

 

背景介绍

自噬(Autophagy)是一种通过自噬溶酶体(Autolysosome)降解部分细胞内容物的分解代谢过程。机体在新陈代谢和抵御外界不良刺激过程中会不断产生受损、衰老和失去功能的细胞、细胞器,以及大量变性的蛋白质与核酸分子,细胞可以通过自噬,将这些物质进行降解回收和再利用,为细胞的重建、再生和修复提供必须原料,实现细胞的再循环和再利用。自噬可以称得上是人体的“废品回收站”和“垃圾处理厂”,保护机体抵御外界病原体的不良入侵和免受细胞内含物的毒害,可以说这是机体与生俱来的一种“化腐朽为神奇”的能力。在营养缺乏的情况下自噬通常也会被激活,此外与许多生理病理过程关联,如发育、分化、免疫、感染、炎症、肿瘤、心血管病、神经退行性疾病等。2016年诺贝尔生理学与医学奖被授予自噬发现者大隅良典(日本),一人独获诺奖,可见自噬研究的重要性,使得自噬研究成为了更火的研究热点。

 

1、自噬与疾病

目前与自噬相关研究最热的三类疾病是肿瘤、神经退行性疾病和免疫性疾病。其中在肿瘤的作用争论最大,扮演着双刃剑的角色。主要表现自噬基因敲除的动物自发肿瘤增多(正常的细胞自噬作用能有效防控肿瘤),相反自噬基因敲除后,增加了化疗、放疗、免疫治疗的敏感性(肿瘤细胞的自噬作用能帮助肿瘤细胞适应各种恶劣环境的挑战)。

 

2、自噬检测方法

文献最常用的自噬检测方法是蛋白印迹检测自噬标志物(Autophagy Marker)LC3的转换(LC3-II/LC3-I)以及荧光显微镜检测LC3点状聚集物的形成。LC3最初发现时被认为是微管关联蛋白1A和1B(microtubule-associated proteins 1A and 1B)的亚基,被称为MAP1LC3,随后发现LC3与酵母蛋白Apg8/Aut7/Cvt5具有较高相似性,并在自噬过程中起重要作用。哺乳动物中有三种LC3同工型蛋白(LC3A、LC3B和LC3C),它们在自噬过程中发生翻译后修饰。合成后的LC3在其羧基端被Atg4迅速剪切,产生胞浆定位的LC3-I(分子量16KD)。在自噬过程中,LC3-I会被包括Atg7和Atg3在内的泛素样体系脂质化,产生分子量为14KD的LC3-II,并定位到自噬小体中(图1)。这样,自噬小体中存在的LC3,和低分子量的LC3-II都被当做细胞发生自噬的Marker,并且LC3-II的含量和发生自噬的程度成正相关。LC3B作为LC3的一种,同样可以用作自噬的Marker。

《自噬标志物LC3B重组兔单抗》

图1 自噬信号通路示意图

 

3、LC3检测注意事项

目前大部分LC3抗体选择的抗原位于N端,PE基团的加入可能会使得N端蛋白构象变化,导致抗体对LC3的亲和力增强,所以LC3-II条带深并不能代表该样本处于高自噬状态。另外,LC3-I对冻融比较敏感,容易在SDS上样缓冲液降解。所以在做半定量检测时,除了使用LC3-II/LC3-I的比值外,也可以配合使用LC3-II与管家蛋白的比值进行半定量。由于LC3是脂化和膜相关蛋白,在细胞裂解时,可在冰上短暂超声,以促进蛋白溶解,使得LC3顺利从膜上解离。此外LC3-I的分子量约16KD,LC3-II在电泳后停留在14KD处,LC3-I和LC3-II均为小分子量蛋白,且差距仅2KD,所以在WB时要注意使用高浓度分离胶进行分离(建议约15%),转膜时使用小孔径0.2μm的 NC膜,采用恒流200mA,转膜40min即可。

特别注意:LC3-I/II的形成和降解是一个动态过程,瞬时LC3-II表达不能反映自噬程度,需要配合使用工具药(如氯喹)分析自噬变化。另外需要查询细胞/组织中各亚型的表达谱,选择合适靶标的抗体。

 

4、LC3B重组兔单抗

工欲善其事必先利其器,ABclonal针对自噬研究,利用第四代重组兔单抗技术(图2)制备了LC3B高质量重组兔单抗(货号A19665)。

《自噬标志物LC3B重组兔单抗》

图2 第四代重组兔单抗制备流程

ABclonal第四代重组兔单克隆抗体制备采用创新的细胞分选,富集,生物信息学,和重组单克隆抗体技术,直接从B细胞中获得理想的兔单克隆抗体。ABclonal在加强自身抗体升级的同时,也可对外承接兔单抗定制服务(图2)。

LC3B重组兔单抗产品优势

多物种多应用(Human/Mouse/Rat, WB/IHC/IF);
特应性好(药物刺激后WB准确检测到LC3B转换(LC3B-II/LC3B-I),IF观察到自噬体,KO验证);
批次更稳定(抗体编码序列已知,质粒保存,重组表达方式获得抗体);
性价比高(可回收利用)。

 

5、A19665 LC3B rabbit mAb数据展示

《自噬标志物LC3B重组兔单抗》

为了助力自噬相关研究,ABclonal研发和生产了众多高质量自噬相关抗体(表1)。

 

6、表1 自噬抗体list(节选)

《自噬标志物LC3B重组兔单抗》

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