ABclonal KO相关产品解决方案

2021年4月21日 | 评论0 | 阅读906 | 点赞0

北京时间10月7日，Emmanuelle Charpentier 和 Jennifer A. Doudna获得2020年诺贝尔化学奖，以表彰她们“在基因编辑技术方面的贡献”。利用这些技术，科学家能够极其精确地改变动物、植物、微生物的DNA。

她们的研究为在人体以及其他动物细胞上实现基因编辑奠定了重要基础。诺贝尔委员会在官方颁奖词中表示：“借助这些技术，研究人员可以非常精准地改变动物、植物、和微生物的DNA。这把基因剪刀彻底改变了分子生命科学，为植物育种带来了新机遇，有望催生创新性癌症疗法，并可能使治愈遗传性疾病这一人类梦想美梦成真。”

目前，基于基因编辑技术进行基因编辑，特别是进行基因的敲除（Knock-out，简称KO）已经在基因功能研究中尤其是抗体特异性验证中得到广泛应用。导致基因编辑在抗体特异性验证中广泛应用的根源是抗体相关研究的“重复危机”。

抗体质量导致的“重复危机”

抗体是生物学研究中使用较为普遍的一种工具，广泛应用于包括酶联免疫吸附（ELISA）、免疫印迹（WB）、免疫沉淀（IP）和免疫组化（IHC）等与免疫检测相关的研究技术中。

近年来，科学家们发现，“重复危机”一直存在于抗体相关研究中，并且愈演愈烈，对生物医学的研究进展造成了巨大影响，毕竟科学的进步是站在“站在巨人肩上”，如果这些发表过的研究成果无法被复制，相关的研究势必会受到很大阻碍，而造成这一困境的罪魁祸首之一在于抗体的质量和性能一致性存在巨大的差异。根据《Nature》统计，80%的生物学家无法重复他人的实验结果，60%无法重复自己的实验结果。Human Protein Atlas Project曾经检验了9000种来自29家供应商的抗体产品，超过50%的产品无法有效工作。据不完全统计，在美国和全世界使用特征不明确的抗体每年分别浪费的经费高达3.5亿和8亿美元，而这样的抗体将会导致实验失败或结果不可靠，加剧抗体研究的“重复危机”。

图片来自Andrew Bradbury et al.,Nature，2015

抗体验证势在必行

类似对抗体验证（抗体特异性）的质疑不再仅限于 CNS 等高分杂志，由于生物试剂普遍存在的特异性问题导致实验结果不可重复，已经引起主流学术期刊的广泛关注。编辑们正逐渐提高对抗体特异性问题的重视，并要求投稿时提供抗体特异性的证据。

万一伙伴们遇到了来自文献编辑的灵魂拷问，建议抗体相关使用者务必记住以下两招：

● 厂商是否提供KO验证数据，如果有，可以放心使用（这种情况可顺利通过编辑审查）；
● 如果没有此数据，可以查阅相关文献是否有抗体特异性验证相关的实验数据，尽可能选择有验证数据支持的抗体（这种情况相对复杂一些，引用已发表文献的KO验证数据）。

为了规范抗体验证标准，提高抗体相关研究重复性，国际抗体验证工作组（IWGAV）出台了一套抗体真实性验证标准并发表在2016年的《Nature Methods》杂志上，强调了抗体验证需要针对应用和背景来开展。文章提出了五点，以指导特定应用中的抗体验证。

图片来自Mathias Uhlen et al., NATURE METHODS，2016

以上列出的五种验证方法中，敲除验证（Knock-out，简称KO）是最有力，最为广泛认可的特异性验证方法。靶点被敲除后，目标蛋白不会在样本中表达，因此成为理想的阴性对照。与对照组一起进行对比试验，抗体是否特异一目了然。

ABclonal立志为全球科学家提供最具性价比的研究产品及生命科学研究解决方案，利用基因敲除技术深入应用于抗体及相关产品验证，并已经形成了KO验证抗体、KO验证ELISA试剂盒、KO细胞株、KO细胞裂解物等多条产品线。同时，为了更加方便广大科研工作者，ABclonal能够提供不同个性化要求的KO 相关技术服务。

1、KO验证抗体案例展示